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　　實驗干貨——PCR試劑盒注意事項與原則

　　PCR試劑盒注意事項：

　　①加入試劑的順序，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

　?、谑褂酶蓛舻乃芰先萜髋渲孟礈煲?。

　?、郯凑针u血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

　　④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

　?、菹礈?strong>酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

　?、奘褂靡淮涡缘奈^以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

　?、邔嶒炛胁挥玫陌鍡l應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

　?、嘣噭礃撕炚f明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

　?、岵挥玫钠渌噭b好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

　　PCR試劑盒原則：

　?、僖镩L度： 15-30bp，常用為20bp左右。

　　②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。

　?、垡飰A基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

　　④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

　?、菀?'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

　?、抟镏杏谢蚰芗由虾线m的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

　?、咭锏奶禺愋裕阂飸c核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

　　ELISA試劑盒 本生(天津)健康科技有限公司產(chǎn)品涵蓋有熒光定量PCR耗材(八聯(lián)管,單管,96孔板,384孔板,封板膜,輔助器等)，ELISA試劑盒，移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，培養(yǎng)基，抗體，血清，色譜耗材，針頭過濾器及實驗室常用耗材。 品種類超過萬種，廣泛應用于科研院校、中心實驗室、分子生物學等科研領域。

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